Prácticas Microbiología

14-11-19 -Objetivo Determinar la ácido-alcohol resistencia de las micobacterias en muestras clinicas -Materiales y reactivos --> Portas -->Asa de siembra -->Fucsina fenicada -->Azul de metileno -->Decolorante --> Fuente de calor --> Microorganismo -Procedimiento 1.Con el asa de siembra cogemos una gota de agua destilada y la depositamos en el porta 2. Tomamos una muestra del microorganismo y la extendemos en el porta haciendo círculos 3.Lo fijamos con el mechero 4.Cubrimos el porta con fucsina fenicada 1 min 5.Calentamos con un hisopo de algodón empapado en alcohol prendido hasta que se emitan vapores 6.Lo mantenemos durante 5 min 7.Lavamos con agua 8.Añadimos el decolorante y lo dejamos 30 segundos 9.Lavamos 10.Añadimos azul de metileno 2 min 11.Lavamos y dejamos secar 12.Observamos al microscopio  

12-11-19 -Objetivo En esta práctica vamos a realizar una serie de pruebas bioquímicas para identificar el tipo de microorganismo -Fundamento Dependiendo del microorganismo nos dará positivo o negativo en ciertas pruebas y así poder ir descartando para averiguar el microorganismo -Materiales --> Placa con medio mannitol salado  --> Placa con medio dnasa -->Gradilla -->Tubo se siembra en picadura -->Parafina -->Disco de novobiocina -->Mechero bunsen -->Asas de siembra --> Microorganismos -Procedimiento a) Catalasa 1.Cogimos un porta y depositamos una colonia 2.Añadimos una gota de agua oxigenada 3.Observamos si hay burbujas, en ese caso seria positiva 4.En nuestro caso salieron burbujas por lo que el microorganismo es catalasa positivo y es un estafilococo b)O/F 1.Sembramos la muestra en picadura en dos tubos con medio de Hugh Leifson 2.En uno de los tubos se añade parafina liquida estéril 3.Los incubamos durante 24-48

Tincion de capsulas de Burry o tinta china                                                     18-10-19 -Objetivo En esta práctica vamos a realizar de nuevo tinción de capsulas pero de Burry o tinta china -Fundamento Es el mismo que en la práctica anterior -Material -->Mechero bunsen -->Placa de petri -->Asa de siembra -->Agua destilada -->Pinzas -->Portas -->Paralelas -->Microscopio -->Aceite de inmersión -->Fucsina -->Nigrosina -Procedimiento 1.Realizamos la extensión y la desecación pero no la fijación al igual que en la práctica anterior 2.Colocamos el porta sobre las paralelas 3.Añadimos fucsina durante 2 min 4.Lavamos con agua destilada 5.Lo dejamos secar 6.Colocamos 2 gotas de nigrosina sobre un extremo del porta y lo extendemos por el método de cuña, es decir, con otro portaobjetos 7.Lo dejamos secar 8.Observamos al microscopio con el objetivo de 100x añadiendo previamente una gota de aceite inmersión

Tinción de capsulas. Método de Anthony -Objetivo En esta práctica vamos a realizar una extensión y tincion de capsulas por el método de Anthony. -Fundamento Las capsulas son acumulación de material mucoso que rodean la pared celular de algunas bacterias. Las capsulas se alteran con el color debido a su naturaleza glucidica, por lo que en esta tincion no se realiza fijación. Se necesita un cultivo de 24h mínimo -Material -->Mechero bunsen -->Gradillas -->Portas -->Pinzas -->Asa de siembra -->Paralelas -->Microscopio -->Colorantes (cristal violeta y sulfato de cobre al 20%) -Procedimiento 1.Realizamos una extensión, desecacion y como en la práctica anterior 2.Colocamos los portas sobre la paralela y añadimos cristal violeta durante 1 min 3.Lavamos con sulfato de cobre 4.Secamos al aire 5.Observamos la preparación al microscopio con el objetivo de 100x añadiendo previamente aceite de inmersion

Tincion de writz                                                                                       18-10-19 -Objetivo En esta práctica vamos a realizar distintas tinciones estructurales -Fundamento Las esporas son una forma de resistencia producidas por algunas bacterias, presentan una pared impermeable que dificulta su tincion, por ello para llevar a cabo esta tinción se necesitan cultivos de 48h como minimo -Material -->Mechero bunsen -->Portas -->Pinzas -->Asa de siembra -->Algodón -->Paralelas -->Microscopio -->Alcohol -->Mechero -->Colorantes(verde malaquita y safranina) -Procedimiento 1.Flameamos el asa 2.Tomamos una gota de agua destilada con el asa y la depositamos en el porta 3.Flameamos el asa de nuevo 4.Cogimos una pequeña porcion de bacillus y la depositamos en el porta sobre la gota de agua y extendemos 5.Lo dejamos secar 6.Lo fijamos pasandolo por la llama del mechero 3 veces 7.Colocamos los portas sobre una rej

Tinción de Gram - y +                                                                   17-10-19 -Objetivo En esta práctica vamos a diferenciar las bacterias Gram + y - -Fundamento Las bacterias Gram + y - tiene distinta composición en su pared bacteriana por lo que vamos a emplear diversos colorantes para diferenciarlas -Material -->Mechero bunsen -->Portaobjetos -->Asas -->Pipeta pasteur -->Colorantes Gram(Cristal violeta,lugol,alcohol-acetona, safrarina) -->Cristalizador -->Paralelas -->Frasco lavador -->Microscopio -->Cultivo bacteriano -Procedimiento a)Extensión 1.Esterilizamos el asa y tomamos 1 gota de SSF y la depositamos en un porta 2.Tomamos una muestra del cultivo y la mezclamos con la gota de agua haciendo circulos sobre el porta 3.Dejamos secar el porta 4.Una vez seca la muestra la fijamos con calor, pasando el porta tres veces por la llama del mechero b)Tincion 1.Colocamos el porta sobre la paralela 2.

Frotis bacteriano y tinciones simples                                         12-10-19 -Objetivo En esta práctica vamos a realizar extensiones bacterianas a partir de muestras sólidas y liquidas, ademas realizaremos tinciones simples con las extensiones y observar los resultados al microscopio -Material -->Asa de siembra -->Mechero bunsen -->Portaobjetos -->Muestras (yogourt, levadura, sarro...) -->Colorantes para tincion -->Aceite de inmersión -->Microscopio -->Gradillas -->Pinzas para portas -->Cubetas y paralelas   -Procedimiento a)Bacterias del yogourt 1.Flameamos el asa de siembra 2.Introducimos el asa en agua destilada para coger 1 gota 3.Depositamos la gota de agua sobre el porta 4.Flameamos el asa de nuevo y la enfriamos tocando el borde del recipiento del yogourt 5.Tomamos una minima porcion del yogourt 6.Depositamos la muestra sobre el porta y la extendemos realizando pequeños circulos 7.Dejamos secar el porta al aire 8.

Realización de siembre-aislamiento en placa petri y tubo                               4-10-19 -Objetivo En esta práctica vamos a aprender a realizar una siembra correctamente tanto en placa petri como en tubo -Materiales  --> Mechero bunsen --> Asa de siembra --> Encendedor --> Cultivos bacterianos --> Placas petri y tubos con medios de cultivo --> Gradillas -Procedimiento a)Siembra en placa petri 1.Encendemos el mechero bunsen 2.Flameamos el asa de siembra hasta que se ponga al rojo vivo 3.Tocamos el lateral de la placa ligeramente con el asa para enfriarla 4.Tomamos la muestra tocando ligeramente donde se observe una colonia 5.Se extiende sobre la placa petri mediante un movimiento de zig-zag 6.Flameamos de nuevo el asa de siembra 7.Repetimos el mismo proceso que el anterior, pero tomando los microorganismos de la muestra anterior, es decir, rozando la muestra de antes y extendiendolo por otra zona de la misma placa haciendo nuevas estrias 8