Práctica 5. Tinción de Gram

Tinción de Gram - y +                                                                   17-10-19

-Objetivo
En esta práctica vamos a diferenciar las bacterias Gram + y -

-Fundamento
Las bacterias Gram + y - tiene distinta composición en su pared bacteriana por lo que vamos a emplear diversos colorantes para diferenciarlas

-Material
-->Mechero bunsen
-->Portaobjetos
-->Asas
-->Pipeta pasteur
-->Colorantes Gram(Cristal violeta,lugol,alcohol-acetona, safrarina)
-->Cristalizador
-->Paralelas
-->Frasco lavador
-->Microscopio
-->Cultivo bacteriano










-Procedimiento
a)Extensión
1.Esterilizamos el asa y tomamos 1 gota de SSF y la depositamos en un porta
2.Tomamos una muestra del cultivo y la mezclamos con la gota de agua haciendo circulos sobre el porta
3.Dejamos secar el porta
4.Una vez seca la muestra la fijamos con calor, pasando el porta tres veces por la llama del mechero


b)Tincion
1.Colocamos el porta sobre la paralela
2.Cubrimos la preparación con cristal violeta durante 1 min
3.Lavamos con agua destilada ligeramente
4.Añadimos lugol y esperamos 1 min
5.Lavamos ligeramente con agua destilada
6.Añadimos alcohol-acetona y esperamos entre 15 y 20 segundos
7.Lavamos con abundante agua
8.Cubrimos el porta con safrarina durante 1 minuto y medio
9.Lavamos con abundante agua
10.Dejamos secar
11.Observamos la preparación al microscopio con el objetivo de 100x previamente añadiendo aceite de inmersion

   

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